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超凈工作臺(tái)在康乃馨的離體快繁的應(yīng)用
一、 儀器設(shè)備和試劑
超凈工作臺(tái)、帶有吸水紙的成套的培養(yǎng)皿,無(wú)菌水
培養(yǎng)基 N6+1 mg/L 6-BA
剪刀、槍型鑷子
量筒、酒精燈、濾紙、蒸餾水、小刷子
95%乙醇、70%酒精、70%酒精棉球、0.2%升汞、甲醛、高錳酸鉀、來(lái)蘇爾
紗布、棉塞、牛皮紙、才培純、肥皂、酒精噴壺
植物的嫩莖、側(cè)芽、莖尖、葉片、花、愈傷組織上的不定芽、胚狀體、試管苗等
二、實(shí)驗(yàn)材料 康乃馨枝條
三、方法和步驟
1 外植體滅菌 取從市場(chǎng)上購(gòu)買(mǎi)的康乃馨枝條,去掉大的葉片,剪取帶腋芽的節(jié)結(jié),用肥皂(洗潔精)清洗表面,再用自來(lái)水沖洗 30-60分鐘,然后在無(wú)菌室(超凈工作臺(tái))內(nèi)用70%酒精浸沒(méi)20-40秒鐘(根據(jù)材料的木質(zhì)化程度掌握具體的浸沒(méi)時(shí)間。用0.2% 的升汞溶液浸泡10-15分鐘,再用無(wú)菌水沖洗3-4次,放入已滅菌的培養(yǎng)皿中的濾紙上待用。
2 接種 先進(jìn)行無(wú)菌室內(nèi)消毒,用紫外燈照射30-45分鐘,地面用低濃度的來(lái)蘇爾溶液消毒,紫外燈關(guān)閉約20分鐘后方可進(jìn)去工作。
超凈工作臺(tái)消毒 開(kāi)啟無(wú)菌風(fēng)開(kāi)關(guān),讓無(wú)菌風(fēng)吹上30-45分鐘后方可工作。并用70%的酒精棉球擦凈工作臺(tái)。
接種時(shí)先點(diǎn)燃酒精燈,鑷子和剪刀都要先浸泡在70%的酒精溶液中。用酒精燈上灼燒好冷卻后的鑷子、剪刀取出一個(gè)側(cè)芽或小段莖,迅速打開(kāi)三角瓶口,將材料才插入瓶?jī)?nèi),注意材料上下端的極性,不能倒插。在酒精燈邊塞回錫箔紙,用記號(hào)筆在瓶體上寫(xiě)明日期和材料。
3 培養(yǎng)條件: 25℃光照13小時(shí)/天 光強(qiáng)1000 Lux
4 繼代培養(yǎng)(見(jiàn)下一個(gè)實(shí)驗(yàn))
5 誘導(dǎo)生根:用低濃度的吲哚乙酸或者萘乙酸或無(wú)激素的N6培養(yǎng)基誘導(dǎo)生根
6 試管苗移栽〈參見(jiàn)有關(guān)其它實(shí)驗(yàn)〉
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